在细胞分裂之前，正确分离姐妹染色单体对于保持基因完整性、避免异倍体性和染色体不稳定性（这些都是许多癌细胞的特性）而言非常重要。有丝分裂检查点，也称作纺锤体组装检查点，可检测着丝粒到纺锤体的正确连接，抑制有丝分裂，并延迟后期过程，直到中期板上的所有染色体保持对齐状态 (1)。MAD2L1 是参与有丝分裂检查点的主要因子 (2)。它以两种构造存在，包括开环未激活性 O-MAD2 形式以及闭环活性 C-MAD2 形式。在有丝分裂之前，MAD2L1 位于细胞液中，主要以闭环、非激活性形式存在。在有丝分裂检查点期间，MAD2L1 将转变为开环激活构造 (3)。与其他检查点蛋白一起，MAD2L1 可结合并抑制 Cdc20 活性，因此可抑制后期促进复合体 (4)。当着丝粒正确连接纺锤体之后，MAD2L1 将释放 Cdc20，激活后期促进复合体，随后降解主要有丝分裂底物，启动中后期转录 (5)。